绵羊红细胞单克隆抗体(sRBC-McAb)
绵羊红细胞(Sheep Red Blood Cell, sRBC)是免疫学研究中常用的模型抗原,其表面抗原可诱导机体产生特异性抗体。 绵羊红细胞单克隆抗体(sRBC-McAb) 是通过杂交瘤技术制备的,能特异性识别 sRBC 表面抗原的单克隆抗体。以下从制备、特性、应用及研究意义等方面展开说明:
一、制备原理与方法
1. 基本原理
抗原免疫:用 sRBC 免疫小鼠(如 BALB/c 小鼠),刺激脾细胞产生针对 sRBC 表面抗原(如血型抗原、膜蛋白等)的特异性 B 淋巴细胞。

细胞融合:将免疫小鼠的脾细胞与骨sui瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞。

筛选与克隆化:通过有限稀释法筛选出能稳定分泌抗 sRBC 抗体的杂交瘤细胞克隆,经克隆化培养后获得单克隆抗体。

2. 关键步骤
免疫程序:通常需多次腹腔注射 sRBC(如初次免疫 + 加强免疫),末次免疫后 3-5 天取脾细胞。

融合剂:常用聚乙二醇(PEG)或电融合法促进细胞融合。

筛选系统:采用 HAT 培养基(含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)筛选杂交瘤细胞(骨sui瘤细胞因缺乏 HGPRT 酶无法存活,脾细胞自然死亡,仅杂交瘤细胞存活)。

抗体检测:通过间接 ELISA 或流式细胞术检测杂交瘤细胞培养上清中的抗 sRBC 抗体活性。

二、sRBC-McAb 的特性
1. 抗原特异性
识别 sRBC 表面特定抗原表位(如 α- 半乳糖苷抗原、血型糖蛋白等),不同克隆的 McAb 可能针对不同表位。

示例:某 sRBC-McAb 可能特异性结合 sRBC 膜上的Band 3 蛋白(一种跨膜阴离子转运蛋白),而另一克隆可能靶向Rh 血型相关抗原。

2. 免疫学特性
抗体类型:多为 IgG 类(取决于免疫小鼠的 B 细胞分化类型),可通过亚型鉴定试剂盒确定(如 IgG1、IgG2a 等)。

亲和力:单克隆抗体的亲和力通常高于多克隆抗体,且批次间一致性高。

3. 理化特性
可通过 Protein A/G 层析纯化,纯度可达 95% 以上,适用于体内外实验。

三、主要应用场景
1. 免疫学基础研究
抗体介导的细胞杀伤:用于研究补体依赖的细胞毒作用(CDC)或抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。例如,sRBC-McAb 与补体结合后可导致 sRBC 裂解,用于补体活性检测。

细胞应答机制:作为模型抗体研究 B 细胞活化、抗体类别转换等过程。

2. 实验动物模型
溶血实验:评估 sRBC-McAb 的溶血能力,用于药物毒性或免疫复合物疾病模型(如自身免疫性溶血性贫血)。

被动免疫模型:通过注射 sRBC-McAb 诱导小鼠产生短暂的特异性抗体,研究体液免疫应答动力学。

3. 生物技术与诊断
流式细胞术:标记荧光素(如 FITC、PE)后,用于分选或鉴定表达 sRBC 抗原的细胞(如杂交瘤细胞或转基因细胞)。

免疫检测试剂:作为标准品用于定量检测抗 sRBC 抗体的效价(如间接 ELISA 中的阳性对照)。

4. 教学与科研工具
在免疫学实验教学中,常用于演示抗体的制备流程、抗原 - 抗体反应原理(如凝集实验、溶血实验)。

四、典型研究案例
补体活性检测(CH50 实验)
原理:sRBC 与相应 McAb 结合后激活补体级联反应,导致 sRBC 裂解,通过测定 50% 溶血所需的补体浓度(CH50 值)评估血清补体总活性。

应用:用于自身免疫病(如系统性红斑狼疮)或免疫缺陷病的补体功能检测。

抗独特型抗体研究
sRBC-McAb 的可变区(Idiotope)可作为抗原,诱导产生抗独特型抗体(Anti-Id),用于研究抗体的免疫调节网络(如 Jerne 网络学说)。

五、注意事项与局限性
1. 交叉反应性
sRBC 表面抗原可能与其他物种红细胞(如人、小鼠红细胞)存在同源性,需验证 McAb 的种属特异性。

2. 表位依赖性
不同克隆的 sRBC-McAb 可能识别 sRBC 的不同表位,实验中需明确所用克隆的表位特征(如线性表位或构象表位)。

3. 体内应用的安全性
若用于动物体内实验,需注意 McAb 的种属来源(如小鼠源性 McAb 可能在体内引发抗小鼠抗体反应,需人源化改造)。


详情:

规格参数

  • 行业分类:

    化工/化学试剂/生化试剂

  • 产品类别:

    动物疫病、宠物抗体

  • 品  牌:

    PhyCell费雪

  • 规格型号:

    1mg

  • 库  存:

    5

  • 生 产 商:

    杭州费雪

  • 产  地:

    中国浙江省杭州市

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